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metadata.dc.type: Tese
Title: Regulação epigenética de foxn1 no epitélio tímico humano durante a senescência
Other Titles: Epigenetic regulation of FOXN1 in human thymac epithelium during senescence
metadata.dc.creator: Reis, Maria Danielma dos Santos
metadata.dc.contributor.advisor1: Savino, Wilson
metadata.dc.contributor.referee1: Moraes, Milton Ozório
metadata.dc.contributor.referee2: Werneck, Miriam Bianchi de Frontin
metadata.dc.contributor.referee3: Coelho, Valéria de Mello
metadata.dc.contributor.referee4: Lima, Leila de Mendonça
metadata.dc.description.resumo: A involução do timo ao longo do envelhecimento se caracteriza por alterações nas células que compõem o seu microambiente, contudo as suas causas ainda não estão completamente esclarecidas. No intuito de contribuir para conhecimento a cerca desse fenômeno, esta tese teve por objetivos avaliar a expressão de genes importantes para o desenvolvimento e função linfopoiética do timo como também investigar o mecanismo de regulação da expressão gênica de FOXN1 através de metilação de DNA. Para isso, foram utilizadas amostras de timo humano de diferentes idades provenientes de pacientes submetidos à cirurgia cardíaca. Quanto aos aspectos morfológicos, os timos de doadores entre cinco dias e um ano de idade (grupo pós-natal) apresentaram uma arquitetura microscópica característica do órgão, sem sinais de involução. Nessas amostras, também foi verificada uma deposição normal de citoqueratina, distribuída pelo órgão como uma fina rede de filamentos intracelulares. Já nos timos de doadores acima de 49 anos (grupo adulto-idoso), observou-se a perda da arquitetura tímica, presença de uma grande quantidade de tecido adiposo e uma deposição de citoqueratina irregular, quando presente, com regiões semelhantes a áreas livres de células epiteliais tímicas (TEC). Nos ensaios de PCRq, foi verificado um aumento na expressão dos genes DLL1 e DLL4, e uma diminuição na expressão de FOXN1 em amostras de timo adulto-idoso em comparação com amostras de timo pós-natal. Além disso, não foi possível detectar a presença da proteína FOXN1 em cortes congelados de timo adulto-idoso em relação às amostras de timo pós-natal. Na linhagem de TEC humana pós-natal, foi verificada a ausência de FOXN1 sob condições de estímulo da via clássica de sinalização de WNT bem como através de cultivo em arcabouços tridimensionais. A análise do padrão de metilação de DNA no gene FOXN1, realizada através de sequenciamento de DNA convertido com bissufito de sódio derivado de amostras de timo humano e da linhagem de TEC humana pós-natal, demonstrou alterações na metilação do DNA em regiões do íntron 1 e do éxon 2 do gene. Estes resultados demonstram, pela primeira vez, que existe um mecanismo de regulação epigenética em FOXN1 durante o envelhecimento no timo.
Abstract: Thymic involution during aging is accompanied by alterations on its microenvironment, however little is known about the mechanisms responsible for these modifications. In this study we aimed to evaluate the expression of genes critical for thymopoiesis and the FOXN1 gene epigenetic regulation by DNA methylation. We obtained human thymic samples from patients ongoing cardiac surgery with different ages. In the morphological evaluation, thymus from donors with five days-old to one year-old (posnatal group) showed a typical thymic architecture, without involution signs, and a normal cytokeratin labelling pattern distributed as a thin filament network on the organ. When thymuses from adult-old donors (49 to 78 years-old) were analyzed, it was seen a disruption on thymus microenvironment, with large adipose tissue infiltration and an irregular cytokeratin pattern revealing some epitelial-free areas. The qPCR assays showed that DLL1, DLL4, FOXN1 e WNT4 genes were expressed during aging on thymus, but DLL1 and DLL4 presented high expression in thymuses from adult-old samples regarding the postnatal group, while the FOXN1 expression was lower in adult-old group. By immunofluorescence, we were not able to detect FOXN1 staining in thymus sections from adult-old samples when compared with samples from postnatal thymus. In human thymic epithelial cell line (THPN), we show that FOXN1 expression is refractory to signals that induce FOXN1 transcription in primary 3D culture conditions and by stimulation of the canonical WNT signaling pathway. Next, we analyzed the DNA methylation pattern on FOXN1 gene by bisulfite sequencing using converted DNA from human thymus and THPN cell line. It was observed differential methylation on intron 1 and exon 2 selected regions on the gene sequence. These results demonstrate for the first time that FOXN1 gene expression in thymus may be regulated through an epigenetic mechanism during aging.
Keywords: FOXN1
Metilação de DNA
Involução tímica
DNA methylation
thymic involution
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Fundação Oswaldo Cruz
metadata.dc.publisher.initials: FIOCRUZ
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação eMulticêntrico em Bioquímica e Biologia Molecular
Citation: REIS, Maria Danielma dos Santos. Regulação epigenética de foxn1 no epitélio tímico humano durante a senescência. 2019. 144 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) – Instituto Oswaldo Cruz, Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular, Rio de Janeiro, 2015.
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
URI: http://www.repositorio.ufal.br/handle/riufal/5692
Issue Date: 13-Apr-2015
Appears in Collections:Monografias de Especializações (Lato Sensu), Dissertações e Teses externas a UFAL - ICBS

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