00 CAMPUS ARISTÓTELES CALAZANS SIMÕES (CAMPUS A. C. SIMÕES) ICF - INSTITUTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS Dissertações e Teses defendidas na UFAL - ICF
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Tipo: Dissertação
Título: Estudo da reatividade ao DNA de derivados ferrocênicos, utilizando técnicas eletroquímicas e espectroscópicos
Título(s) alternativo(s): Study of the reactivity dna ferrocenic derivatives, Using technical electrochemical and spectroscopic
Autor(es): Silva, Emanuella Gomes da
Primeiro Orientador: Goulart, Marília Oliveira Fonseca
metadata.dc.contributor.referee1: Fidelis, Maria Aline Barros
metadata.dc.contributor.referee2: Dornelas, Camila Braga
metadata.dc.contributor.referee3: Grillo, Luciano Aparecido Meireles
metadata.dc.contributor.referee4: Paula, Francine Santos de
Resumo: Agentes DNA-reativos estão associados a vários tipos de interação com DNA, que incluem intercalação, ligação não covalente às fendas, ligação covalente / ligação cruzada, quebra de DNA, e incorporação de nucleosídeo, entre outros, produzindo alterações em sua estrutura. Quando essas alterações se fixam de forma capaz de serem transmitidas, pode ocorrer genotoxicidade. O DNA é um alvo terapêutico importante, apesar de ser menos seletivo. Nos últimos anos, moléculas organometálicas têm sido descritas como compostos promissores na terapia contra o câncer e outras doenças. Face ao atraente perfil farmacológico identificado por substâncias derivadas do ferroceno, este trabalho visa investigar a interação de derivados ferrocênicos e seus precursores orgânicos com o DNA, por meio do emprego de técnicas eletroquímicas e espectrofotométricas, a fim de propor mecanismos de ação biológica via interação com DNA e possível reatividade ao DNA dos compostos. No trabalho, utilizaram-se biossensores de dsDNA, ssDNA em solução e microbalança eletroquímica de cristal de quartzo (MECQ), com avaliação de parâmetros eletroquímicos; espectroscopia no UV-Vis com concentração de DNA fixa e variação da concentração dos analitos, em tampão Tris-HCl pH 7,2 com 10 e 30% de etanol. A inibição da fluorescência do complexo de brometo de etídio (BE)- DNA foi avaliada em concentrações crescentes dos compostos, nas mesmas condições de UV-Vis. A investigação do retardamento da mobilidade eletroforética (RME) foi realizado em DNA pUC 19, em concentração de 100 mol L-1. Os resultados eletroquímicos evidenciaram a perturbação da estrutura nativa do dsDNA e exposição da Guanina e Adenina para oxidação, via interação com a substância P41 e da Adenina, via interação com a substância P365. O Ferroceno não interagiu com DNA. Uma interação direta com ssDNA foi registrada apenas para P41. Por MECQ, observa-se o aumento de massa de p41 em presença da SAM de DNA. Por espectroscopia no UV-Vis, foram calculados os valores de constante de formação (Kf), com base na absorção do DNA, cujos maiores valores foram obtidos para P15: Kf = 1 x 105 L mol-1 e P41: Kf = 2,4 x 104 L mol-1. As constantes calculadas por fluorescência também foram obtidas e comparadas, com os dados da Doxorrubicina, agente reconhecidamente intercalante. Fc-25 mostrou maiores valores de Kf. Todas as substâncias apresentaram estequiometria de ligação 1:1. No retardamento da mobilidade eletroforética (RME) observou-se uma diferença em presença de H3, comparável à Cisplatina, os demais não alteraram a mobilidade. A combinação de técnicas e os resultados alcançados sugerem que o tipo de interação entre os compostos e CT-DNA seja por intercalação, exceto H3 que possivelmente interage de forma direta por ligação de hidrogênio com as bases, sem intercalação.
Abstract: DNA-reactive agents are associated with several types of interaction with DNA, including intercalation, non-covalent binding to the grooves, covalent bonding / crosslinking, DNA breakage and the incorporation of nucleosides producing alterations in its structure. When these changes are irreversible, they might be transmitted, causing genotoxicity. DNA is an important therapeutic target, despite its lower selectivity. In recent years, organometallic molecules have been described as promising compounds in the therapy against cancer and other diseases. Given the attractive pharmacological profile identified for ferrocene derivatives, this work aims to use biosensors of dsDNA and ssDNA in solution, for a pharmacoelectrochemical study of the interaction with CT-DNA, also using UV-vis/fluorescence titration of tamoxifen and benzo-hydrazide-based ferrocenic derivatives, investigating their DNA-reactivity profile. In the present work, dsDNA biosensor, ssDNA in solution, quartz crystal microbalance (EQCM) and electrochemical evaluation were used; UV-Vis spectroscopy at a fixed DNA and increasing concentration of the analytes, in Tris-HCl buffer pH 7.2, with 10 and 30% ethanol. The inhibition of ethidium bromide (BE)-DNA complex fluorescence was assessed at increasing concentrations of the compounds, at the same conditions as used for UV-Vis studies. The retardation of electrophoretic mobility (REM) was performed on DNA pUC 19 at compounds’ concentration of 100 mol L-1. The electrochemical results showed a disturbance of the native structure of dsDNA and exposure of Guanine and Adenine bases, in one case, and only adenine, in the other case, upon interaction with P41 and P365, respectively. Ferrocene itself did not show interaction. A direct interaction with ssDNA was observed only with P41; by EQCM, with evidence of the mass increase of p41 in the presence of the SAM of DNA. UV-Vis spectroscopy allowed the calculation of Kf values based on DNA uptake, which were higher for P15, with Kf = 1 x 105 L mol-1 and P41 Kf = 2.4 x 104 L mol-1. The constants calculated by fluorescence were also obtained and compared with the data of Doxorrubicine, well-recognised as a intercalating drug. Fc-25 showed higher Kf values, all showed substantial accommodations binding stoichiometry 1:1. Through REM, a difference in the presence of H3, comparable to cisplatin, was noticed. The other compounds did not alter the mobility. The combination of techniques and the results obtained suggest that the type of interaction between the compounds and CT-DNA is by intercalation except for H3, which possibly interacts directly with the bases, by hydrogen bonding.
Palavras-chave: CT-DNA
Derivados ferrocênicos
Reatividade – CT-DNA
Biosensor de dsDNA
Espectroscopia
Ferrocenic derivatives
DNA biosensor
Spectroscopy
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA
Idioma: por
País: Brasil
Editor: Universidade Federal de Alagoas
Sigla da Instituição: UFAL
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas
Citação: SILVA, Emanuella Gomes da. Estudo da reatividade ao DNA de derivados ferrocênicos, utilizando técnicas eletroquímicas e espectroscópicos. 2019. 106 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) – Escola de Enfermagem e Farmácia, Programa de Pós Graduação em Ciências Farmacêuticas, Universidade Federal de Alagoas, Maceió, 2014.
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.repositorio.ufal.br/handle/riufal/4499
Data do documento: 8-dez-2014
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