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http://www.repositorio.ufal.br/jspui/handle/riufal/2534
Tipo: | Dissertação |
Título: | Purificação parcial e caracterização de uma TAG- lipase do gorgulho do milho Sitophilus zeamais |
Título(s) alternativo(s): | Partial purification and characterization of a TAG - lipase from maize weevil Sitophillus zeamais |
Autor(es): | Cavalcante Júnior, João Carlos de Gusmão |
Primeiro Orientador: | Grillo, Luciano Aparecido Meireles |
metadata.dc.contributor.advisor-co1: | Pereira, Hugo Juarez Vieira |
metadata.dc.contributor.referee1: | Dornelas, Camila Braga |
metadata.dc.contributor.referee2: | Gomes, Francis Soares |
metadata.dc.contributor.referee3: | Nascimento, Ticiano Gomes Do |
Resumo: | Os triacilgliceróis, incluídos na classe de lipídeos neutros, são essenciais para manutenção da vida na maioria dos vertebrados e invertebrados, uma vez que fazem parte da reserva energética e servem de substratos para síntese de metabolitos secundários. Nos insetos a mobilização e digestão desta reserva energética ocorre pela ação de triacilglicerol-lipase (TAG- lipase) que disponibiliza esses lipídeos sob a forma de diacilglicerol (DAG) e ácidos graxos livres. Substâncias que interagem e são capazes de inibir enzimas essenciais para sobrevivência dos insetos são uma alternativa promissora no controle de pragas. Sendo assim, este estudo tem como objetivo purificar parcialmente e caracterizar TAG-lipases do inseto Sitophilus zeamais a partir de seu extrato enzimático como possíveis alvos para o desenvolvimento de novas formas de controle. A purificação parcial da TAG-lipase foi realizada utilizando uma coluna de interação hidrofóbica, com injeção de extrato enzimático na qual quatro frações apresentaram atividade lipásica. Em seguida as frações foram imobilizada por eletroforese SDS-PAGE 10% e confirmada por zimograma. A lipase apresentou uma massa molecular de aproximadamente 50 KDa. Em seguida as quatro amostras foram unidas e foi feita a caracterização da lipase. Foi mostrado que a atividade lipásica apresenta crescente com o aumento da concentração de proteínas, também foi exposto que a força iônica não foi capaz de inibir a atividade lipásica, e que o pH ideal da lipase parcialmente purificada foi de 8,5. Por fim a lipase foi parcialmente inibida com uso de inibidor PMSF, mostrando que a enzima isolada tem característica de serinoprotease no sítio ativo. |
Abstract: | The triacylglycerols, in class of neutral lipids, are essential to maintenance of life in most vertebrates and invertebrates, since part of the energy reserve and serve as substrates for the synthesis of secondary metabolites. Insects mobilization and digestion of this energy reserve is the action of triacylglycerol lipase (TAG- lipase) that provides these lipids in the form of diacylglycerol (DAG) and free fatty acids. Substances that interact and are able to inhibit enzymes essential to survival of insects are a promising alternative for the control of pests. Thus, this study aims to purify and characterize partially-TAG lipases of Sitophilus zeamais insect from its enzymatic extract as possible targets for the development of new forms of control. Partial purification of TAG-lipase was performed using a hydrophobic interaction column with enzymatic extract injection in which four fractions showed lipase activity. Then the fractions were immobilized by SDS-PAGE and confirmed by zymography. A lipase with a molecular mass of approximately 50 kDa. Then the four samples were bonded was taken and characterization of the lipase. It was shown that has lipase activity increasing with increasing concentration of protein, was also exposed to the ionic strength was able to inhibit the lipase activity, and that the optimum pH of the partially purified lipase was 8.5. Finally the lipase used was partially inhibited with PMSF inhibitor, showing that the isolated enzyme is serine protease characteristic of the active site. |
Palavras-chave: | Milhos - Doenças e pragas Sitophilus zeanmais Lipídeos Triacilglicerol - Lipase Sitophilus zeamais Fatty acids and Triacilglicerol- Lipase |
CNPq: | CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Editor: | Universidade Federal de Alagoas |
Sigla da Instituição: | UFAL |
metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas |
Citação: | CAVALCANTE JÚNIOR, João Carlos de Gusmão. Purificação parcial e caracterização de uma TAG- lipase do gorgulho do milho Sitophilus zeamais. 2016. 56 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Escola de Enfermagem e Farmácia, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, Universidade Federal de Alagoas, Maceió, 2016. |
Tipo de Acesso: | Acesso Aberto |
URI: | http://www.repositorio.ufal.br/handle/riufal/2534 |
Data do documento: | 20-mai-2016 |
Aparece nas coleções: | Dissertações e Teses defendidas na UFAL - ICF |
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