00 CAMPUS ARISTÓTELES CALAZANS SIMÕES (CAMPUS A. C. SIMÕES) ICBS - INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE Dissertações e Teses defendidas na UFAL - ICBS
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Tipo: Dissertação
Título: Infecção placentária pelo Zika vírus : investigação das vias de sinalização e funções celulares afetadas
Título(s) alternativo(s): Zika Virus Placental Infection: Investigation of Signaling Pathways and Affected Cell Functions
Autor(es): Pires, Keyla Silva Nobre
Primeiro Orientador: Borbely, Alexandre Urban
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Borbely, Karen Steponavicius Cruz
metadata.dc.contributor.referee1: Marques, Otávio Cabral
metadata.dc.contributor.referee2: Bevilacqua, Estela Maris Andrade Forell
Resumo: Introdução: A infecção pelo Zika Vírus (ZIKV) é considerado um grande problema de saúde pública, devido a sua capacidade de atravessar a barreira placentária e infectar o feto, podendo causar uma condição chamada de Síndrome Congênita do Zika Vírus. Embora os casos de ZIKV na gestação tenham reduzido drasticamente, a infecção ainda merece grande atenção por aumentar os gastos públicos a curto, médio e longo prazo. Apesar dos esforços científicos realizados nos últimos anos, ainda são necessários estudos sobre a patogênese do ZIKV e a resposta imunológica na placenta. Objetivo: Investigar os aspectos morfológicos, imunológicos e moleculares associados à fisiopatologia da infecção gestacional pelo ZIKV em diferentes modelos experimentais in vitro. Métodos: Células HTR-8/SVneo derivadas do primeiro trimestre de gestação, células de citotrofoblasto extraviloso (CTEV) e explantes de vilosidades coriônicas de placentas a termo foram infectados com uma cepa africana (MR766) e uma cepa asiática (PE243) do ZIKV. A infecção foi confirmada por citometria de fluxo, imunofluorescência e RT-qPCR para as células e por RT-qPCR para os explantes. As células foram analisadas por microscópio de força atômica (AFM). A resposta imunológica foi observada pela análise da expressão de genes e produção de citocinas, assim como ativação de vias moleculares específicas. Resultados: Explantes placentários foram infectados apenas com a cepa PE243 e apresentaram aumento da produção de IL-6 (p < 0,05) e IL-8 (p < 0,05). As células HTR-8/SVneo foram infectadas por ambas as cepas (72,2% para MR766 e 80,2% para PE243) e apresentaram alterações morfológicas/topográficas em células infectadas, mas não exibiram nenhuma alteração na expressão gênica ou produção de citocinas. Já as células CTEV também foram infectadas com ambas as cepas (63,8% para MR766 e 66,5% para PE243), apresentando consideráveis alterações morfológicas/topográficas no tamanho, forma e rugosidade das células; e apresentaram produção aumentada de IFN-α2 (p < 0,0005), IFN-λ1 (p < 0,01) e IL-6 (p < 0,01) após infecção por PE243, e apenas aumento de IFN-λ1 (p < 0,05) após infecção por MR766. A sinalização pelas moléculas analisadas diferiu apenas na infecção por PE243, que aumentou a expressão de p-IRF3 (p < 0,05) e IRF9 (p <0,05), enquanto p-STAT2 permaneceu inalterada após a infecção com ambas as cepas. Conclusões: A resposta ao ZIKV é distinta em diferentes modelos de cultura celular e a depender da cepa viral. No fim da gestação, as células CTEV apresentam um panorama diferente de outros modelos celulares, conseguindo produzir alguns IFN e mantendo vias de resposta antiviral ativas, o que pode indicar que são mais combativas ao vírus do que células de primeiro trimestre.
Abstract: Introduction: Zika Virus (ZIKV) infection is considered a major public health problem, due to its ability to cross the placental barrier and infect the fetus, which can cause a condition called Congenital Zika Virus Syndrome. Although the cases of ZIKV during pregnancy have drastically reduced, the infection still deserves great attention as it increases public spending in the short, medium and long term. Despite the scientific efforts made in recent years, studies on the pathogenesis of ZIKV and the immune response in the placenta are still needed. Objective: To investigate the morphological, immunological and molecular aspects associated with the pathophysiology of gestational infection by ZIKV in different experimental models in vitro. Methods: HTR-8/SVneo cells derived from the first trimester of gestation, extravillous cytotrophoblast cells (EVT) and chorionic villus explants from term placentas were infected with an African strain (MR766) and an Asian strain (PE243) of ZIKV. Infection was confirmed by flow cytometry, immunofluorescence and RT-qPCR for cells and by RT-qPCR for explants. Cells were analyzed by atomic force microscope (AFM). The immune response was observed by analyzing gene expression and cytokine production, as well as activation of specific molecular pathways. Results: Placental explants were infected only with the PE243 strain and showed increased production of IL-6 (p < 0.05) and IL-8 (p < 0.05). HTR-8/SVneo cells were infected by both strains (72.2% for MR766 and 80.2% for PE243) and showed morphological/topographic changes in infected cells, but showed no change in the gene expression or cytokine production. EVT cells were also infected with both strains (63.8% for MR766 and 66.5% for PE243), showing considerable morphological/topographic changes in cell size, shape and roughness, and showed increased production of IFN-α2 (p < 0.0005), IFN-λ1 (p < 0.01) and IL-6 (p < 0.01) after PE243 infection, and only an increase in IFN-λ1 (p <0.05) after MR766 infection. The signaling by the molecules analyzed differed only in PE243 infection, which increased the expression of p-IRF3 (p < 0.05) and IRF9 (p < 0.05), while p-STAT2 remained unchanged after infection with both the strains. Conclusions: The response to ZIKV is distinct in different cell culture models and depending on the viral strain. At the end of pregnancy, EVT cells present a different picture from other cell models, managing to produce some IFN and maintaining active antiviral response pathways, which may indicate that they are more virus-fighting than first-trimester cells.
Palavras-chave: Zika vírus
Infecção por Zika vírus
Interferons
Placenta
Congenital Infection
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE
Idioma: por
País: Brasil
Editor: Universidade Federal de Alagoas
Sigla da Instituição: UFAL
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde
Citação: PIRES, Keyla Silva Nobre. Infecção placentária pelo Zika vírus : investigação das vias de sinalização e funções celulares afetadas. 2022. 88 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) - Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde, Programa de Pós Graduação em Ciências da Saúde, Universidade Federal de Alagoas, Maceió, 2021.
Tipo de Acesso: Acesso Embargado
URI: http://www.repositorio.ufal.br/jspui/handle/123456789/9011
Data do documento: 31-ago-2021
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