00 CAMPUS ARISTÓTELES CALAZANS SIMÕES (CAMPUS A. C. SIMÕES) IQB - Instituto de Química e Biotecnologia Dissertações e Teses defendidas na UFAL - IQB
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Tipo: Tese
Título: Desenvolvimento de kit e protocolo alternativos para coleta e extração de DNA de amostras forenses e restos mortais degradados
Autor(es): Silva, Rosana Coutinho Freire
Primeiro Orientador: Ramalho Neto, Cícero Eduardo
metadata.dc.contributor.referee1: Almeida, Cícero Carlos de Souza
metadata.dc.contributor.referee2: Galdino, Fabiane Caxico de Abreu
metadata.dc.contributor.referee3: Pitta, Guilherme Benjamin Brandão
metadata.dc.contributor.referee4: Grillo, Luciano Aparecido Meireles
Resumo: A robustez da molécula de DNA, aliado ao fato de que ela contém informação digital, torna-a ideal como fonte de identificação que resiste ao tempo e às agressões ambientais impostas a amostras presentes em locais de crime, porém esses mesmos fatores fazem com que essas amostras apresentem DNA em baixa concentração e com degradações em sua estrutura química. A recuperação de material genético de remanescentes de esqueletos humanos é parte essencial para a identificação humana forense, pois a identificação genética pelo DNA é um método que supera todos os outros métodos existentes, dentre eles, a identificação por impressões digitais e a identificação por arcada dentária. Para que se tenha êxito na obtenção de DNA de amostras de ossos degradados e se obtenha um eletroferograma com a quantidade mínima de marcadores recomendados pela comunidade científica forense, é imprescindível que se proceda a técnicas mais modernas de extração e purificação de DNA. Dentre essas técnicas, temos a desmineralização de ossos e dentes pulverizados em moinhos específicos, seguida de extração orgânica tradicional, em que não se consegue a lise total das células, o que muitas vezes gera perfis eletroforéticos incompletos. Considerando, que na área forense, é iminente a necessidade de obtenção de DNA de ossos e dentes por meio de protocolos simples e eficazes, o presente trabalho pretendeu aperfeiçoar o método de descalcificação desses materiais biológicos, de modo a se conseguir um DNA de alta qualidade em amostras de ossos antigos, já nas primeiras tentativas de extração, gerando eletroferogramas com a detecção de alelos em todos os marcadores recomendados pela comunidade forense. Nesse sentido, o nosso protocolo de extração alternativo mostrou-se eficiente, pois possibilitou o isolamento de DNA de alta qualidade de um osso de 17 anos de inumado e de dentes de 3 anos de inumado, de modo a apresentar um perfis genéticos completos com os sistemas PowerPlex Fusion 6C e PowerPlex Fusion, ambos da empresa Promega Corporation e com o sistema GlobalFiler® da empresa Life Technologies. Em relação ao DNA de toque, quando um crime é cometido, o autor pode depositar algumas células da pele em objetos presentes na cena de crime. Se o objeto tocado é coletado, possíveis evidências ali existentes podem ser identificadas pela análise do DNA de toque, possibilitando-se ligar o criminoso à cena do crime. Para a coleta de DNA de toque em cenas de crime ou em laboratórios forenses de testes para DNA, algumas técnicas convencionais são utilizadas, porém estas têm se mostrado muitas vezes ineficiente, pois esse tipo de amostra biológica apresenta escasso número de células e consequente baixa quantidade de DNA que geralmente é deixada nos suportes, quando da realização da coleta. Outro problema verificado é a contaminação por amostras biológicas de outras pessoas, por esses motivos, para obtenção de bons resultados de DNA de toque, são necessários adequados coleta e armazenamento desses materiais, bem como, a utilização subsequente de uma técnica de extração ideal para se recuperar o maior número de cópias de DNA possível. Diante do exposto, registramos a patente n.º BR 10 2018 071232 2, que tem por finalidade precípua a produção de um kit contendo coletores e solução extratora para DNA de toque, presente em amostras biológicas humanas coletadas em locais de crime em diferentes suportes, com finalidade de vinculação biológica criminal forense.
Abstract: The robustness of the DNA molecule, coupled with the fact that it contains digital information, makes it ideal as a source of identification which resists weather and environmental aggressions imposed on samples found in crime scenes, but these same factors make these samples exhibiting low DNA concentration and with degradation in your chemical structure. The recovery of remaining genetic material of human skeletons is essential part human forensic identification, because the genetic identification by DNA is a method that outperforms all other existing methods, including the identification fingerprints and dental records identification. In order to succeed in obtaining DNA from bone samples degraded and produce an eletropherogram with the minimum amount of recommended by the scientific community forensic markers, it is imperative that the most modern techniques of extraction and DNA purification. Among these techniques, we have the bone and tooth demineralization pulverizated in specific Mills, followed by traditional organic extraction, in that you don't get the total cell lysis, which often generates the electrophoretic profiles. Considering that in forensics, is the imminent need for obtaining DNA from bones and teeth by using simple and effective protocols, this work is intended to improve the descaling method of these biological materials in order to achieve a High quality DNA samples from ancient bones, in the first attempts of extraction, generating eletropherograms with the detection of alleles in all markers recommended by forensic community. In this sense, our alternative extraction protocol proved to be efficient, because it allowed the isolation of high quality DNA from the bone of 17 years of buried and 3 years of teeth buried in order to present a complete genetic profiles with PowerPlex Fusion 6C and PowerPlex Fusion, both from company Promega Corporation and with the GlobalFiler ® system of company Life Technologies. In relation to the touch DNA, when a crime is committed, the author can deposit some skin cells into objects present at the crime scene. If the object is touched is collected, possible evidence existing there can be identified by DNA analysis, enabling the criminal to the crime scene. For the collection of touch DNA from crime scenes or in forensic DNA testing laboratories, some conventional techniques are used, but these have been shown to often inefficient, because this type of biological sample presents scarce number of cells and consequent low amount of DNA that is usually left in brackets when the day of collection. Another problem checked is contamination by biological samples of other people, for these reasons, to obtain good results of DNA, are necessary suitable collection and storage of these materials, as well as the subsequent use of an optimal extraction technique to recover the largest possible DNA copy numbers. On the exposed, we register the Patent No. 10 2018 071232 2 BR, which main purpose is the production of a kit containing collectors and extracting solution for DNA, present in human biological samples collected at crime scenes in different media with binding criminal forensic biological purpose.
Palavras-chave: Genética forense
DNA - Ossos
Descalcificação (Técnica genética)
DNA de toque
Forensic DNA
DNA bones
Decalcification of bones
Touch DNA
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
Idioma: por
País: Brasil
Editor: Universidade Federal de Alagoas
Sigla da Instituição: UFAL
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia da Rede Nordeste de Biotecnologia - RENORBIO
Citação: SILVA, Rosana Coutinho Freire. Desenvolvimento de kit e protocolo alternativos para coleta e extração de DNA de amostras forenses e restos mortais degradados. 2018. 98 f. Tese (Doutorado na Rede Nordeste de Biotecnologia) – Instituto de Química e Biotecnologia, Programa de Pós-Graduação da Rede Nordeste de Biotecnologia, Universidade Federal de Alagoas, Maceió, 2018.
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.repositorio.ufal.br/handle/riufal/3819
Data do documento: 5-dez-2018
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