00 CAMPUS ARISTÓTELES CALAZANS SIMÕES (CAMPUS A. C. SIMÕES) IQB - Instituto de Química e Biotecnologia Dissertações e Teses defendidas na UFAL - IQB
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Tipo: Dissertação
Título: Avaliação da interação das proteínas do ovo (ovalbumina e outras) com os antibióticos tetraciclina, oxitetraciclina e clorotetraciclina empregando técnicas espectroscópicas e eletroforese
Título(s) alternativo(s): Evaluation of the interaction of egg proteins (ovalbumin and others) with the antibiotics tetracycline, oxitetracycline and clortetracycline employing espectroscopic techniques and electrophoresis
Autor(es): Dantas, Maria Dayanne de Araújo
Primeiro Orientador: Santos, Josué Carinhanha Caldas
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Figueiredo, Isis Martins
metadata.dc.contributor.referee1: Botero, Wander Gustavo
metadata.dc.contributor.referee2: Cardoso, Silvia Helena
Resumo: A ovalbumina é a proteína majoritária da clara do ovo, sendo amplamente utilizada na alimentação, principalmente na suplementação nutricional e na composição de diferentes alimentos. As tetraciclinas constituem uma classe de antibióticos de amplo espectro empregada em veterinária na criação de animais e produção de aves. No entanto, o seu uso abundante e indiscriminado pode resultar na presença de resíduos deste medicamento em alimentos como o ovo, causando efeitos tóxicos, além da possibilidade de reações alérgicas. Este trabalho teve como objetivo estudar a interação da ovalbumina (comercial e in natura) com os antibióticos tetraciclina, oxitetraciclina e clorotetraciclina empregando fluorescência molecular, absorção molecular e eletroforese. A partir dos dados obtidos por fluorescência foram calculadas as constantes de Stern–Volmer, ligação, o número de sítios de ligação (n) entre as três tetraciclinas (TC, OTC e CTC) e a ovalbumina, e por fim os parâmetros termodinâmicos (G, H e S) em diferentes condições de pH. Os valores de Kb para a TC variaram de 2,11 (± 0,21) a 25,8 (± 0,30) x104 L mol-1, para a OTC variaram de 3,96 (± 0,07) a 58,4 (± 0,50) x104 L mol-1 e por fim para a CTC variaram de 2,45 (± 0,13) a 32,4 (± 0,40) x104 L mol-1 a depender do valor do pH do meio. O número de sítios de ligação em todas as condições foi próximo à unidade. O mecanismo de interação foi estudado e os dados experimentais demonstraram que o processo de interação entre a ovalbumina e as diferentes tetraciclinas ocorreu através de quenching estático com formação de complexos não-fluorescentes. Os dados termodinâmicos calculados indicaram que as interações ocorrem espontaneamente (ΔG < 0), e as forças de ligação predominantes são ligações de hidrogênio, forças de Van der Waals e interações eletrostáticas, a depender do valor de pH do meio. A partir dos estudos por fluorescência sincronizada foi possível observar que houve deslocamentos para os resíduos de tirosina apenas em pH 7,4 independente da tetraciclina e da origem da ovalbumina. Para os resíduos de triptofano foram observados deslocamentos em todos os valores de pH independente do ligante e da origem da ovalbumina. Através dos estudos por fluorescência 3D observou-se que houve redução na intensidade de fluorescência dos picos 2 e 3 para as proteínas comercial e in natura independente da tetraciclina adicionada. A partir dos estudos por FRET foi possível calcular as distâncias intermoleculares entre a ovalbumina e as três tetraciclinas estudadas em diferentes condições de pH, que variaram de 2,95 a 3,52 nm. Com os estudos de competição observou-se que houve competição pelo sítio de ligação da ovalbumina apenas para o íon Mg(II) para a TC. Para a OTC, houve competição pelo sítio de ligação da proteína entre todos os íons avaliados. Por fim, para CTC, a adição dos íons Ca(II), Mg(II) e Cu(II) provocou competição entre estes íons e a CTC pela proteína. Através dos estudos por UV-Vis verificou-se que houve a formação de complexos entre a ovalbumina e as diferentes tetraciclinas avaliadas neste trabalho, independente do pH do meio. A partir dos estudos por eletroforese foi observado um deslocamento na banda protéica para a proteína nativa (indicando aumento da mobilidade eletroforética) em função da presença dos ligantes. A partir dos estudos por ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN 1H) observou-se que houve deslocamento e alargamento dos sinais para todos os hidrogênios da molécula de tetraciclina, e os tempos de relaxação (T1) para os átomos de hidrogênio da tetraciclina reduziram na presença da ovalbumina. Por fim, com base nos resultados obtidos empregando diferentes técnicas espectroscópicas e eletroforese foi possível avaliar a interações de três tetraciclinas em diferentes condições de pH.
Abstract: The albumin is the major protein from egg white, being widely used in the food, mainly in nutritional supplementation and in different food composition. Tetracyclines are a class of antibiotics broad spectrum employed in animal husbandry and poultry production. However, its abundant use and indiscriminate may result in the presence of residues this medicine in foods like egg causing toxic effects, in addition the possibility of allergic reactions. The aim of this work was evaluation interaction between ovalbumin (commercial and in natura) with tetracycline, oxitetracycline and chlortetracycline employing molecular fluorescence, molecular absorption and electrophoresis. Through the results obtained by fluorescence were calculated Stern-Volmer´s constant, biding, binding sites number between the three tetracyclines and ovalbumin, finally, the thermodynamic parameters (ΔG, ΔH and ΔS) under different conditions of pH. Kb values for TC variety from 2.11 (± 0.21) to 25.8 (± 0.30) x104 L mol-1 for OTC variety from 3.96 (± 0.07) to 58.4 (± 0.50) x104 L mol-1. And finally, the values for CTC variety from 2.45 (± 0.13) to 32.4 (± 0.40) x104 L mol-1. Depending on the pH of the resource. The number of the binding sites in all conditions was close to unity. The interaction mechanism was studied and the experimental results showed that interaction process between ovalbumin and differents tetracyclines occurred by static quenching with non-fluorescent complexes formation. The thermodynamics parameters calculated indicated that interactions occur spontaneously (ΔG < 0), and bonding forces predominant are hydrogen bonds, Van der Waals force and electrostatic interactions, depending on the pH of the resource. From the studies by synchronous fluorescence was observed shift to the tyrosine residues only pH 7.4 independent of tetracycline and ovalbumin source. For tryptophan residues were observed shift in all values of pH independent of ligand and source of ovalbumin. Through the studies by 3D fluorescence was observed decreased the fluorescence intensity of peaks 2 e 3 for commercial and egg white proteins independent of tetracycline added. From studies by FRET was possible to calculate the intermolecular distances between ovalbumin and three tetracycline studied under different conditions of pH, variety from 2.95 to 3.52 nm. With competition studies was observed there was competition for ovalbumin binding site only by ion Mg (II) and TC. For OTC, there was competition for the binding site of the protein among all ions evaluated. Finally, for CTC, the addition of ions Ca (II), Mg (II) e Cu (II) caused competition between these ions and CTC by protein. Through UV-Vis studies, there was the formation of complexes between ovalbumin and distintic tetracyclines evaluated in this work, independent of pH and source. From electrophoresis studies was observed shift of the protein band for the native protein (indicating increase electrophoretic mobility) due to the presence of the ligands. The nuclear magnetic resonance of hydrogen (1H NMR) studies indicated that signals of all hydrogens tetracycline molecule had shift and enlargement and the relaxation time (T1) decreasing in the presence of the ovalbumin.
Palavras-chave: Antibióticos - Interação
Ovalbumina
Tetraciclina
Fluorescência molecular
Espectrofotometria - UV-Vis
Eletroforese
Antibiotics - Interaction
Ovalbumin
Tetracycline
Molecular Fluorescence
Spectrophotometry - UV-Vis
Electrophoresis
CNPq: CNPQ::CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA::QUIMICA ANALITICA::ANALISE DE TRACOS E QUIMICA AMBIENTAL
Idioma: por
País: Brasil
Editor: Universidade Federal de Alagoas
Sigla da Instituição: UFAL
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Química e Biotecnologia
Citação: DANTAS, Maria Dayanne de Araújo. Avaliação da interação das proteínas do ovo (ovalbumina e outras) com os antibióticos tetraciclina, oxitetraciclina e clorotetraciclina empregando técnicas espectroscópicas e eletroforese. 2015. 93 f. Dissertação (Mestrado em Química e Biotecnologia) - Instituto de Química e Biotecnologia, Programa de Pós-Graduação em Química e Biotecnologia, Universidade Federal de Alagoas, Maceió, 2015.
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.repositorio.ufal.br/handle/riufal/2720
Data do documento: 26-mar-2015
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