00 CAMPUS ARISTÓTELES CALAZANS SIMÕES (CAMPUS A. C. SIMÕES) ICBS - INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE Dissertações e Teses defendidas na UFAL - ICBS
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Tipo: Dissertação
Título: Análise funcional do silenciamento gênico de versicam em células trofoblásticas e sua implicação em doenças gestacionais
Título(s) alternativo(s): Functional analysis of versicam gene silencing in trophoblastic cells and their implication in gestational diseases
Autor(es): Gonçalves, Camilla Mendes
Primeiro Orientador: Borberly, Alexandre Urban
metadata.dc.contributor.referee1: Silva, Rafael Brito da
metadata.dc.contributor.referee2: Bevilacqua, Estela Maris Andrade Forell
Resumo: Introdução: O Versicam é um proteoglicano responsável por diversas funções em diferentes células, sendo especialmente regulado em tumores invasivos. As isoformas V0 e V1 de versicam são produzidas apenas por células trofoblásticas invasivas do primeiro trimestre de gestação e de placentas anormalmente invasivas, embora as possíveis funções do versicam ainda permaneçam elusivas. Deste modo, verificar as funções que o versicam possui nessas células é essencial para futuras abordagens em doenças invasivas como a placenta anormalmente invasiva. Objetivo: Analisar os efeitos celulares e funcionais do silenciamento gênico de versicam em células trofoblásticas. Métodos: Células HTR-8/SVneo derivadas do primeiro trimestre de gestação foram silenciadas para mRNA e proteína de versicam. Foram analisadas morte celular, proliferação, fases do ciclo celular, fosforilação de proteína de adesão focal (FAK) e diferentes parâmetros de motilidade, bem como a produção de citocinas Th1 / Th2. Por fim, a forforilazação da via Rho/ROCK foi verificada. Resultados: O silenciamento de versicam foi eficiente, os níveis de mRNA e proteína versican foram reduzidos (p < 0,001). A proliferação foi levemente reduzida e o tempo de fechamento da ferida in vitro foi atrasado (p < 0,001). A velocidade das células foi analisada através de videomicroscopia time-lapse também foi reduzida (p < 0,0001), assim como a invasão através de câmaras transwell revestidas com fibronectina foi reduzida (p < 0,05). A análise de pFAK mostrou diminuição da fosforilação após o silenciamento. Várias citocinas também foram afetadas, com produção reduzida de IL-1β, IL-5, IL-6 e IL-10, enquanto aumentaram a produção de IL-2 e IL-13 (p < 0,05). A análise da via Rho/ROCK mostrou diminuição da fosforilação após o silenciamento, confirmando seu envolvimento na sinalização de versicam. Conclusões: O versicam mostrou-se uma importante molécula-chave para a regulação positiva da motilidade de células trofoblásticas, e com propriedades relevantes de modulação imune no microambiente da placenta. Portanto, pode ser um alvo farmacológico em futuras terapias com foco na modulação da motilidade do trofoblasto.
Abstract: Introduction: Versican is a proteoglycan responsible for several functions in different cells, being especially upregulated in invasive tumors. Versican V0 and V1 isoforms are produced only by invading trophoblast cells from the first trimester of pregnancy and from abnormally invasive placentas, although versican possible functions remains elusive. As such, the verification of versican roles in trophoblast cells is essential to future research on invasive diseases as the abnormally invasive placenta. Aim: To analyze cellular and functional effects of versican gene silencing in trophoblast cells. Methods: First trimester-derived HTR-8/SVneo cells were silenced for versican and its efficiency tested at both mRNA and protein levels. Cell death, proliferation, cell cycle phases, focal adhesion kinase (FAK) phosphorilation and different motility parameters, as well as Th1/Th2 cytokines production were analyzed. Lastly, Rho/ROCK signaling pathway phosphorylation was verified. Results: Versican silencing was efficient, as versican mRNA and protein levels were utterly reduced (p <0,001). Proliferation was slightly reduced, and in vitro wound closure time was greatly delayed (p < 0,001). Cell speed was analyzed through time-lapse microscopy and it was also reduced (p < 0,0001), as well as the invasion through fibronectin-coated transwell chambers (p< 0,05). The analysis of pFAK showed decreased phosphorylation after silencing. Several cytokines were also affected, with reduced production of IL-1β, IL-5, IL-6 and IL-10, while the increased production of IL-2 and IL-13 (p < 0,05). The analysis of Rho/ROCK pathway showed decreased phosphorylation after silencing, confirming its involvement in versican signaling. Conclusions: Versican proved to be an important key molecule upregulator of trophoblast motility and with relevant immune modulation properties in the placenta microenvironment. Therefore, it could be a pharmacological target in future therapies focusing on the modulation of trophoblast motility.
Palavras-chave: Silenciamento gênico - Versicam
Placenta
Trofoblastos
Motilidade celular
Doença trofoblástica gestacional
Gene Silencing – Versican
Trophoblast
Cell movement
Gestational trophoblastic disease
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA
Idioma: por
País: Brasil
Editor: Universidade Federal de Alagoas
Sigla da Instituição: UFAL
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde
Citação: GONÇALVES, Camilla Mendes. Análise funcional do silenciamento gênico de versicam em células trofoblásticas e sua implicação em doenças gestacionais. 2019. 103 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) – Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde, Programa de Pós Graduação em Ciências da Saúde, Universidade Federal de Alagoas, Maceió, 2019.
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.repositorio.ufal.br/handle/riufal/5900
Data do documento: 12-jul-2019
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